ELISA樣本制備和收集指南

1.液體類型樣品

液體類實(shí)驗(yàn)樣品含: 血清、血漿、尿液、胸腹水、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

【細(xì)胞培養(yǎng)上清】

將細(xì)胞培養(yǎng)基移至離心管，并在4℃條件下以1,500 rpm離心10分鐘。立即等分上清液并于-80℃下保存樣品。盡可能減少樣品凍融。

【血清】

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，在4℃條件下以3,000 rpm離心10分鐘。立即等分上清液并于-80℃下保存樣品。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。避免反復(fù)凍融樣品。

【血漿】

將全血收集到含抗凝血?jiǎng)┑墓苤?，根?jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，在4℃條件下以3,000 rpm離心10分鐘。立即等分上清液(血漿)并于-80℃下保存樣品。避免反復(fù)凍融樣品。

【尿液】

用無菌管收集，并在 4℃下以10,000 x g離心2分鐘。立即等分上清液并于-80℃下保存樣品。避免反復(fù)凍融樣品。

【唾液】

收集樣品并在4℃下以10,000 x g離心2分鐘。等分上清液并在-80℃下保存樣品。避免反復(fù)凍融樣品。

2.組織樣品

采集組織(最好在冰上操作，并應(yīng)盡可能快以防止被蛋白酶降解)樣品后，稱取組織凈重，用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。將樣品保存? 80℃下以便后續(xù)使用或放置在冰上進(jìn)行直接勻漿。加入一定量的組織提取緩沖液，用手工或勻漿器將樣品勻漿充分。在4℃下以13,000 rpm離心20分鐘。置于冰上，將上清液(可溶的蛋白質(zhì)提取物)等分至新的冷卻管中并在-80℃下保存樣品。避免反復(fù)凍融樣品。

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