問：原代細胞和細胞系有什么區(qū)別？

答：原代細胞直接源自組織，一旦培養(yǎng)，原代細胞的壽命是有限的。原代細胞是理想的，因為它們保留了體內觀察到的許多標記。細胞系是不斷生長和復制并經歷遺傳轉化的細胞群，具有無限的生長潛力。出于醫(yī)學和/或研究目的，細胞系已在體外維持。細胞系可以通過非常大量的傳代培養(yǎng)進行培養(yǎng)，并且在非常高的傳代次數下可能會發(fā)生進一步的基因型/表型變化。一般來說，細胞系缺乏體內觀察到的許多標記，并且也顯示出與原代細胞非常不同的標記譜。

問：ScienCell 如何確認細胞類型？

A. 細胞類型可以通過多種方式確認。細胞形態(tài)學非常重要，可以幫助我們識別正確的細胞。此外，我們的質量控制部門使用免疫熒光來確認特定細胞類型的識別標記的存在。免疫熒光也可用于識別污染細胞。

問：我可以獲得有關我的批次細胞的哪些捐贈者信息？

答：我們保存所有人類和動物原代細胞的記錄。如果您有特定要求（年齡和/或性別），請在訂購前聯系我們的客戶服務部門。

問：我們是否對我們的細胞進行人類白細胞抗原分型？

答：人類白細胞抗原 (HLA) 分型是一種確定一個人的組織與另一個人的組織匹配程度的方法。我們目前不在 ScienCell 研究實驗室對此進行測試。

問：我的原代細胞瓶是否 100% 純？

答：原代細胞永遠不會是 100% 純的，但是，我們會盡力獲得盡可能純的細胞?？偸谴嬖谖廴炯毎?。

問：我需要多少經驗才能開始使用正常原代細胞？

答：強烈推薦具有在無菌條件下使用層流罩工作的經驗，并且具有使用其他細胞類型的經驗是有利的。如果您是細胞培養(yǎng)的初學者或想建立細胞培養(yǎng)實驗室，我們可以為您提供幫助。請聯系我們的細胞培養(yǎng)專家。

問：收到后我應該如何處理冷凍保存的細胞？

A. 收到包裹后，立即將冷凍保存的細胞從干冰運輸容器轉移至液氮中。快速從運輸容器轉移到液氮中，以防止細胞解凍。請勿將細胞儲存在 -20°C 或 -80°C 下，因為這會對細胞造成不可逆轉的損壞。

問：當我第一次對凍存細胞進行平板培養(yǎng)時，是否需要離心細胞以去除 DMSO？

答：我們不建議通過離心細胞來去除 DMSO 殘留物。離心過程對細胞的危害可能比 DMSO 殘留物更大，特別是如果使用不適當的高速。當您鋪板細胞時，DMSO 將在培養(yǎng)基中充分稀釋。例如，如果將整個冷凍管（1 毫升）細胞放入裝有 15 毫升培養(yǎng)基的 T-75 燒瓶中，則 DMSO 濃度將低于 0.67% (v/v)。如果以 5000 - 10,000 個細胞/cm2 鋪板細胞，DMSO 的濃度會更低。

問：我應該使用什么類型的培養(yǎng)箱來培養(yǎng) ScienCell 原代細胞？

我們建議使用 37°C、5% CO ₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)來自 ScienCell 的所有原代細胞。所有 ScienCell 培養(yǎng)基都需要 5% CO ₂來維持細胞的最佳 pH 值。

問：如何用冷凍保存的細胞建立培養(yǎng)物？

A. 注意：詳細說明請參閱電池產品表。

1. 從液氮中取出一小瓶細胞，注意保護手和眼睛。

2. 將小瓶上的蓋子擰松 1/4 圈 10 秒，以釋放可能滯留在螺紋中的液氮，然后重新擰緊蓋子。

3. 將冷凍小瓶放入 37°C 水浴中。握住并輕輕旋轉小瓶，直至內容物全部解凍。迅速從水浴中取出小瓶，用 70% 乙醇擦拭，然后轉移至無菌區(qū)。

4. 小心地取下蓋子，不要接觸內螺紋。輕輕地將小瓶中的內容物重新懸浮并分配到含有培養(yǎng)基的平衡的聚-L-賴氨酸或纖連蛋白包被的培養(yǎng)容器中（請參閱產品表上列出的具體說明）。

5. 蓋上培養(yǎng)容器的蓋子或蓋子，輕輕搖動容器以使細胞均勻分布。如有必要，松開蓋子以進行氣體交換。

6. 將培養(yǎng)容器放回培養(yǎng)箱（37°C，5% CO2/95% 空氣）。

7. 為了獲得最佳結果，培養(yǎng)開始后至少 16 小時內不要擾動培養(yǎng)。第二天刷新培養(yǎng)基以去除殘留的 DMSO 和未貼壁的細胞（除非產品表上另有說明）。

問：我應該向細胞培養(yǎng)瓶中添加多少體積的培養(yǎng)基？

A. 建議在 T-25 燒瓶中添加 5 ml 培養(yǎng)基，在 T-75 燒瓶中添加 15 ml 培養(yǎng)基，在 T-150 燒瓶中添加 30 ml 培養(yǎng)基。

問：我應該多久更換一次原代細胞的細胞培養(yǎng)基？

答：請參閱您正在使用的細胞類型的產品表以獲取具體說明。一般來說，根據細胞的融合情況，每 2-3 天更換一次培養(yǎng)基。注意：冷凍保存的細胞解凍并鋪板后，應在約 16 小時后進行第一次培養(yǎng)基更換，以去除 DMSO 殘留和死細胞。

問：我應該在什么匯合處傳代細胞？

答：這取決于細胞類型。例如，內皮細胞永遠不應該變得太匯合（90%-100%），因為這會促進污染細胞的生長并導致內皮細胞衰老。另一方面，成纖維細胞可以在較高的匯合度（90%-98%）下進行傳代培養(yǎng)，并且不會受到較高匯合度的不利影響。一般來說，原代細胞不應該變得太匯合，因為這會導致細胞衰老并促進污染細胞的生長。

問：正常原代細胞的推薦分流比是多少？

答：ScienCell 研究實驗室不推薦正常細胞的分流比，因為胰蛋白酶消化后的細胞數量各不相同。我們建議在胰蛋白酶消化后對細胞進行計數，并按照產品表上針對特定細胞類型推薦的接種密度接種細胞。

問：群體倍增和傳代次數有什么區(qū)別？

答：群體倍增是指培養(yǎng)物中細胞總數增加兩倍，最常在指數或“對數"生長階段提及。術語傳代次數是指將細胞群從培養(yǎng)容器中取出并進行傳代培養(yǎng)（傳代）過程的次數，以保持細胞處于足夠低的密度以刺激進一步生長。

問：我可以使用正常原代細胞進行多少次傳代？

答：ScienCell 不使用術語“傳代"來描述增長潛力，因為每個客戶使用不同的分流比。ScienCell 研究實驗室在細胞產品表上標出了預期的群體倍增次數。

問：非增殖細胞可以傳代培養(yǎng)嗎？

A. 非增殖細胞不能進行傳代培養(yǎng)，因為它們不增殖。這包括以下細胞類型：神經元、小膠質細胞、巨噬細胞和其他一些細胞類型。產品表將表明細胞是否不增殖。

問：我可以重新冷凍 ScienCell 的正常原代細胞嗎？

答：我們不建議客戶重新冷凍 ScienCell 的人類和動物原代細胞。

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